molpit
Login:
Password:
remember
PIT00147 Редактирование генома эмбрионов электрическим полем

Редактирование генома факторами транскрипции, такими как нуклеазы с доменами типа "цинковые пальцы" {zinc finger nucleases (ZFN)}, активаторами транскрипции типа эффекторных нуклеаз {transcription activator like effector nucleases (TALEN)}, или CRISPR/Cas9 системой позволяет точно и эффективно редактировать гены в эмбрионах, особенно, если им дать хороший шок, как это сделано недавно в работе T Kaneko et al. Simple knockout by electroporation of engineered endonucleases into intact rat embryos Kaneko2014 (pdf, 398КБ) // Scientific Reports 4, Article number: 6382 (2014). Единственная картинка в статье толково поясняет эдектрокорпорацию инженерных нуклеаз в интактные эмбрионы крыс

srep06382-f1 (133Кб)
(a) Суперэлектропоратор НЕПА 21 (слева) и стеклянная камера с металлическими пластинами (справа). Эмбрионы помещали в линию между металлическими пластинами (стрелка). (b) Иллюстрация электрических импульсов электропоратора. (c) первый сканирующий импульс высокого напряжения и короткой продолжительности делает микроотверстия в зоны прозрачности (слева) и мРНК в PBS затем перемещается в цитоплазму с несколькими начальными импульсами низкого напряжени и большой длительности после углубившкго импульса (в центре). МРНК затем переносили в ооциты следующими импульсами измененной полярности (справа). (d) Флуоресцентный анализ меченого тетраметилродамином декстрана, который был введен в эмбрионы путем электропорации импульсами шириной 0, 0,5, 1,5, и 2,5 мс.

Peter Belobrov 21 Oct 2014 02:14
© International Open Laboratory for Advanced Science and Technology — MOLPIT, 2009–2021