molpit
Login:
Password:
remember
PIT00361 P-гранулы (РНК + белок) в новом свете

Отмечая 4 года посту PIT00003 P гранулы Вариант 2, 2 года - PIT00124 и год - PIT00207, хочу обратить ваше внимание на принципиально новый взгляд на комплексы РНК с белком. Этому мы обязаны в значительно степени лаборатории Дженнифер Додны (Jennifer A. Doudna), на 1-й странице сайта которой бактериальный иммунитет, РНК интерференция эукариот и контроль трансляции. Это, пожалуй, три основных инструмента книги клетки (CellBook), которые открыты в лаборатории Дженнифер.

B.T. Staahl, M. Benekareddy, C. Coulon-Bainier, A. Ghosh, J.A. Doudna. Efficient protein-based genome editing by local delivery in the brain // Poster 317.09/T7 at 2016 Neuroscience Meeting, Session 317 - Neuroprotective Mechanisms: Signaling and Gene Expression of 14/11/2016. Abstract. RNA-guided genome editing triggered by the CRISPR-Cas9 DNA endonuclease has the potential to cure the underlying cause of a genetic disease. This therapeutic strategy will require tissue-specific delivery of the editing molecules in vivo, a goal that is particularly challenging in the brain. Here we show the Cas9 ribonucleoprotein (RNP) complexes can be used to edit post-mitotic neurons in the mouse brain. We also show that protein engineering of Cas9 increased the efficiency of in vivo neuronal cell editing ten-fold. Cas9 RNPs introduced locally in the brain trigger genome editing in cells including hippocampal, striatal and cortical neurons by a mechanism that involves spreading beyond the immediate site of injection. We also show that Cas9 RNP complexes are stable over 6 hours in blood plasma. These advances provide a robust technology for application of genome-editing in the brain to treat the underlying cause of neurological genetic diseases.

Аннотация. РНК-управляемое редактирование генома инициируется CRISPR-Cas9 эндонуклеазами ДНК, которые имеет потенциал для лечения основной причины генетического заболевания. Эта терапевтическая стратегия требует доставки тканеспецифических молекул для редактирования in vivo. Эта цель является особенно сложной в головном мозге. Показано, что Cas9 рибонуклеопротеиновый (Cas9 RNP) комплексы могут быть использованы для редактирования пост-митотических нейронов в головном мозге мыши. Авторы также показали, что Cas9 белковая инженерия повысила эффективность редактирования нейронов in vivo в десять раз. Cas9 RNPs вводились локально для редактирования геномов переключающих клеток мозга, включая гиппокамп, полосатое тело и кортикальные нейроны по механизму, который включает в себя распространение за пределы непосредственного места инъекции. Авторы также показали, что Cas9 RNP комплексы стабильны в течение 6 ч в плазме крови. Эти достижения обеспечивают надежную технологию для применения редактирования генома в мозге при лечении основной причины неврологических генетических заболеваний.

И хотя ни постера ни статьи нет ещё, вчера эти тезисы прокомментировала Kayt Sukel. A Safe New Approach for CRISPR-Cas9 Gene Therapy in Humans // BioTechniques 29/11/2016

Вышел хороший обзор
Fuguo Jiang, and Jennifer A. Doudna. CRISPR-Cas9 Structures and Mechanisms // Annual review of biophysics 46, 505-529 (2017). doi 10.1146/annurev-biophys-062215-010822 Abstract. Many bacterial CRISPR-Cas systems employ the dual-RNA-guided DNA endonuclease Cas9 to defend against invading phages and conjugative plasmids by introducing site-specific double-stranded breaks in target DNA. Target recognition strictly requires the presence of a short protospacer adjacent motif (PAM) flanking the target site, while subsequent R-loop formation and strand scission are driven by complementary base pairing between the guide RNA and target DNA, Cas9–DNA interactions, and associated conformational changes. The use of CRISPR-Cas9 as an RNA-programmable DNA targeting and editing platform is simplified by a synthetic single guide RNA (sgRNA) mimicking the natural dual-tracrRNA-crRNA structure. This review aims to provide an in-depth mechanistic and structural understanding of Cas9-mediated RNA-guided DNA targeting and cleavage. Molecular insights from biochemical and structural studies provide a framework for rational engineering aimed at altering catalytic function, guide RNA specificity, PAM requirements, and reducing off-target activity for the development of Cas9-based therapies against genetic diseases.

Аннотация. TBA (редактирую)

А пока почитаем про механизм работы CRISPR-Cas9, который на редкость хорошо и аккуратно описан в русскоязычной Википедии CRISPR.

Интересный для понимания сути дела текст на сайте биомолекула.ру CRISPR-системы - иммунизация прокариот.

Более подробное рассмотрение можно найти в самых первых больших обзорах

Patrick D. Hsu, Eric S. Lander, and Feng Zhang. Development and applications of CRISPR-Cas9 for genome engineering // Cell 157 (6), 1262-1278 (2014). doi 10.1016/j.cell.2014.05.010 Cited by 1074

Jennifer A. Doudna, and Emmanuelle Charpentier. The new frontier of genome engineering with CRISPR-Cas9 // Science 346 (6213), 1258096 (2014).DOI 10.1126/science.1258096 Cited by 798

Peter Belobrov 30 Nov 2016 04:06
© International Open Laboratory for Advanced Science and Technology — MOLPIT, 2009–2020